També estem fent experiments de PCR, per què els resultats són sempre molt pitjors que altres?

També estem fent experiments de PCR, per què els resultats són sempre molt pitjors que altres?

Al laboratori, mireu la PCR d’altres persones, l’eficiència d’amplificació és alta, la tira d’electroforesi és perfecta i mireu-ne la pròpia, difícil de fer durant molt de temps, sentiu que la reacció és molt bona, el resultat d’una prova falsa positiva ... el problema?

Crec que molts dels nostres socis també han trobat diversos problemes. Quan ens trobem amb una paret en experiments de PCR, analitzarem inconscientment els factors del sistema de reacció, però sovint ignorem la important influència dels consumibles en els experiments.

El vostre resultat de PCR és incorrecte; els consumibles de PCR poden ser el motiu essencial. D’una banda, la micro contaminació de consumibles o la introducció d’inhibidors causaran contaminació experimental; D'altra banda, una selecció incorrecta de consumibles també farà patir els resultats experimentals.

El problema torna a aparèixer. Hi ha molts tipus de consumibles de PCR, per tant, com triar-ne els adequats per fer l’experiment més fluït? Quins són els problemes que cal prestar atenció? No us preocupeu, avuiI combinat amb molts anys d’experiència, resolent els problemes habituals de selecció de consumibles de PCR, espero ajudar-vos.

 

P1: Per què els consumibles de PCR solen estar fets de material PP?

Huida: atès que els subministraments de PCR solen estar en contacte directe amb reactius o mostres, els materials de polipropilè (PP) són biològicament inerts, no s’adhereixen als biomoleculars i tenen una bona tolerància química i temperatura (es poden autoclapar a 121 ° C, també pot suportar canvis de temperatura durant el cicle tèrmic).

 

P2: Com he de triar entre diferents mides de tubs / plaques de PCR?

HUIDA: Propòsit de la selecció: seleccionar els productes adequats segons els requisits experimentals específics. La major part de la mida del tub de PCR pot complir els requisits de reacció de PCR. Sobre aquesta base, es recomana triar primer el tub de baix volum. Com que el tub / placa de reacció de baix volum té un petit espai aeri, es millora la conductivitat de la calor i es redueix l’evaporació. Al mateix temps, cal evitar afegir massa o massa poques mostres. Massa pot conduir a una conductivitat tèrmica disminuïda, a vessaments i contaminació creuada, mentre que massa poc pot provocar la pèrdua d’evaporació de la mostra.

Especificacions i volums de tubs de reacció comuns:

Tub simple / combinat: 0,5 ml, 0,2 ml, 0,15 ml

Placa de 96 pous: 0,2 ml, 0,15 ml

Plat de 384 pous: 0,04 ml

 

P3: Quan la quantitat de mostra sigui petita, escolliré una sola canonada o una combinada, però per què alguns tenen coberta plana i d'altres tenen coberta convexa?

Huida: quan la quantitat de mostra sigui petita, es preferirà el tub únic o el tub combinat. No obstant això, quan el volum de reacció és gran, el tub únic és dominant i el volum pot arribar a 0,5 ml. I la coberta plana i la coberta convexa tenen l’avantatge, concretament, es pot consultar la informació següent.

Tub únic: 0,2 ml i 0,5 ml; Pot triar la quantitat de mostra de manera flexible.

Tub de connexió: 0,2 ml o 0,15 ml és opcional; Són freqüents 8 o 12 tubs.

Coberta plana: pot proporcionar una transmissió precisa del senyal de fluorescència per qPCR; Marques fàcils d’escriure.

Coberta convexa: contacte amb la coberta calenta de l’instrument de PCR per reduir la deformació del tub de reacció causada per la pressió; Tanmateix, afectarà la transmissió del senyal de fluorescència i no es pot aplicar a l'experiment qPCR.

 

P4: Per què algunes plaques de PCR tenen faldilla i d’altres no?

Huida: De fet, la faldilla de la placa PCR està dissenyada per adaptar-se millor a les aplicacions d'automatització, proporcionant suport estable i resistència mecànica a l'instrument, així com una major estabilitat durant el procés de pipetatge.

Les plaques de PCR es divideixen generalment en no hemline, half-hemline i full-hemline.

Sense Placa: apta per a la majoria de màquines PCR o màquines qPCR, però no per a aplicacions d'automatització. L’estabilitat no és elevada en el procés de pipetatge, de manera que s’ha d’utilitzar amb suport de plaques.

Placa de vora de mitja faldilla: es pot adaptar a l'aplicació d'etiquetes o codis de barres i a l'aplicació automàtica i té una bona estabilitat de pipetatge.

Placa de vora de faldilla completa: molt adequada per a aplicacions experimentals automatitzades, també es pot adaptar a l'etiqueta i a l'aplicació del codi de barres. Té una bona resistència mecànica, es pot utilitzar en instruments de PCR de mòduls protuberants i té una alta estabilitat en el procés de pipetatge.

 

P5 :Per a les plaques de PCR, per què les cantonades i les etiquetes no són el mateix?

Huida: Depèn de l'efecte del tall de cantonada i del marcatge.

Tall de cantonada: L'elecció de la posició de tall de cantonada de la placa de PCR depèn dels requisits de l'instrument adequat per a un fàcil posicionament.

Identificació: els marcadors alfanumèrics de les plaques de PCR ajuden a identificar els pous individuals i les ubicacions de la mostra. Generalment per al logotip digital en relleu o per al gravat. Per a algunes aplicacions automatitzades, les plaques de reacció impreses i marcades estan millor segellades.

 

P6: Per què algunes plaques de PCR són convexes mentre que d'altres són planes? Quin és millor?

Huida: El que més s’adapta és el millor. Hi ha dos tipus de plaques PCR comunes: marge de porus pla i marge de porus elevat.

Placa de reacció de marge de forat pla, adequada per a la majoria d’aparells de PCR

Les plaques de reacció amb vores d’orifici elevants faciliten el segellat de la membrana i redueixen el risc de contaminació creuada entre mostres.

 

Huida té molts anys d’experiència en la producció i processament de productes de PCR i estàndards alts de la indústria. La línia de productes és rica i pot satisfer la gran majoria d’aplicacions experimentals de PCR. Vine a triar els productes adequats per a les teves aplicacions experimentals.

谷歌推广疫情产品PCR


Hora de publicació: 03-06-2021